تهیه سوسپانسیون سلولی با استفاده از هموژنایزر بافت
سوسپانسیون سلولی از جمله مواد اولیه کلیدی در بسیاری از آزمایش های بیولوژیکی خصوصا آزمایش های کشت بافت گیاهی است. به همین دلیل تهیه سوسپانسیون سلولی نیز اولین و مهمترین مرحله در انجام این آزمایش ها به شمار می آید. این فرایند با هدف استخراج سلول ها به صورت جدا از هم از بافت های پیچیده انجام می شود. در نتیجه این کار امکان آنالیز دقیق تری از ساختار و عملکرد سلولی فراهم می شود. هموژنایزر آزمایشگاهی که به آن هموژنایزر بافت نیز گفته می شود، یکی از ابزارهای اصلی آماده سازی نمونه های زیستی است. در این مقاله پروتکل تهیه سوسپانسیون سلولی با هموژنایزر آزمایشگاهی را بررسی می کنیم. همچنین با مثال هایی عملی از تهیه سوسپانسیون های بافت گیاهی و جانوری نیز آشنا می شوید.
رویان ایران، بزرگترین مرجع تخصصی فروش تجهیزات آزمایشگاهی، هموژنایزر آزمایشگاهی مکانیکی 1 تا 5 میکرون با کیفیت بالا و بهترین قیمت همراه با ضمانت و خدمات پس از فروش، عرضه می کند.
سوسپانسیون سلولی چیست و چه کاربردی دارد؟
سوسپانسیون سلولی به مخلوطی یکنواخت از سلول های منفرد و جدا از هم در یک محیط مایع گفته می شود. برخلاف ساختار بافتی که سلول ها در آن به هم چسبیده اند، در سوسپانسیون سلولی، هر سلول به صورت مجزا و شناور قرار دارد. این ویژگی، امکان انجام آزمایش هایی مثل:
- کشت سلول در محیط های مصنوعی
- استخراج و آنالیز DNA و RNA
- بررسی پاسخ سلولی به داروها
- شمارش سلولی و سنجش زیستی
- تولید واکسن ها و آنتی‌بادی ها
را فراهم می کند.
پروتکل تهیه سوسپانسیون سلولی با هموژنایزر آزمایشگاهی به صورت مرحله به مرحله
شاید تهیه سوسپانسیون سلولی در آزمایشگاه هایی که هر روز با آزمایش های آنالیز بافت، سلول و کشت سر و کار دارند، به نظر ساده و رویتن بیاید. اما انجام دقیق هر از مرحله از این فرایند، به کیفیت آزمایش و نتیجه کلی به دست آمده کمک می کند. در نظر داشته باشید که باید تمام این مراحل را زیر هود لامینار انجام دهید.
1. انتخاب و جداسازی بافت نمونه
در ابتدا، بافت مورد نظر از منبع حیوانی یا گیاهی استخراج می شود. برای مثال، در آزمایش های انسانی ممکن است از نمونه های کبد، پوست یا … استفاده شود و در مطالعات گیاهی نیز برگ، ریشه یا ساقه مورد استفاده قرار گیرد.
2. شست و شوی بافت و استریلیزاسیون آن
نمونه بافت استخراج شده باید با استفاده از محلول های بافر یا سرم فیزیولوژیک استریل شسته شود تا هرگونه آلودگی خارجی (خاک، خون، میکروارگانیسم ها) حذف گردد.
3. کوچکسازی اولیه
بافت استریل شده باید به وسیله اسکالپل استریل به قطعات کوچکتر تقسیم شود. اگر این مرحله انجام نشود، در نهایت نمونه همگنی نخواهید داشت.
4. همگن سازی با هموژنایزر آزمایشگاهی
مراحل آماده سازی نمونه برای هموژنایزر آزمایشگاهی را باید به طور کامل انجام دهید تا نمونه استانداردی برای ادامه مراحل آزمایش ها داشته باشید.
- سرعت چرخش را با توجه به جنس و نوع بافت تعیین کنید.
- پروب یا تیغه مناسب نصب کنید.
- تیغه و ظرف را استریل کنید.
- زمان بهینه را درنظر بگیرید.
- دمای مناسب برای جلوگیری از آسیب به سلول ها فراهم کنید. در صورت لزوم می توانید از یخ یا یخ خشک استفاده کنید.
5. فیلتر کردن و جداسازی
پس از هموژنیزاسیون، نمونه از صافی های مخصوص عبور داده می شود تا بقایای غشای سلولی یا فیبرهای اضافی جدا شود. بسته به نیاز آزمایش، ممکن است نمونه در این مرحله سانتریفیوژ نیز شود تا سلول ها تهنشین و از فاز مایع جدا شوند.
هموژنایزر آزمایشگاهی برای تهیه سوسپانسیون سلولی ضروری است
از آنجایی که هموژنایزر آزمایشگاهی کمک می کند که تمام قسمت های نمونه به صورت یکنواخت خرد شوند، بهترین وسیله برای تهیه سوسپانسیون های سلولی هستند.
اگر سرعت، زمان و نوع تیغه هموژنایزر آزمایشگاه مطابق نوع نمونه، درست انتخاب شوند، از تخریب سلول های جلوگیری می شود.
البته در برخی آزمایش ها برای استخراج ماده وراثتی سلول ها لازم است که دیواره سلولی شکسته شود. این کار را نیز می توان با استفاده از هموژنایزر مکانیکی به درستی انجام داد.
نکات مهم در استفاده از هموژنایزر آزمایشگاهی برای تهیه سوسپانسیون سلولی
قبل و بعد از استفاده از هموژنایزر، تمام قسمت هایی که با نمونه در تماس هستند باید با محلول های ضد عفونی شسته شوند.
اگر با نمونه های حساس یا خطرناک کار می کنید (مثل سلول های انسانی یا حیوانی)، حتماً در فضای هود لامینار کلاس II کار انجام شود.
برای جلوگیری از گرم شدن بیش از حد نمونه، استفاده از یخ خشک یا قرار دادن ظرف نمونه در حمام یخ توصیه می شود.
بافت نرم، مثل کبد یا برگ، به سرعت پایین تری نیاز دارد. در حالی که بافت های سفت تر مانند عضله ریشه گیاه، ممکن است نیاز به سرعت و زمان بیشتری داشته باشند.
کاربردهای سوسپانسیون سلولی در آزمایش های مختلف
- استخراج DNA یا RNA باکیفیت برای آنالیز ژنتیکی
- تست های دارویی برای سنجش سمیت دارو بر سلول
- انتقال ژن با روش هایی مثل الکتروپوریشن یا ترنسفکشن
- تولید محیط های تلقیح در صنعت داروسازی یا واکسن سازی
- غربال گری سلولی در مطالعات سرطان، آلرژی و بیماری های ویروسی
مثال واقعی از پروتکل تهیه سوسپانسیون سلولی با هموژنایزر آزمایشگاهی از بافت کبد موش
مواد و تجهیزات مورد نیاز:
- بافت کبد تازه از موش (۰.۵ گرم)
- بافر فسفات استریل (PBS)
- هموژنایزر آزمایشگاهی
- سانتریفیوژ
- صافی سلولی ۷۰ میکرون
- هود لامینار کلاس II
مراحل انجام:
شستشوی بافت: بافت کبد در سه نوبت با PBS استریل در هود لامینار شسته شود.
برش اولیه: بافت با اسکالپل استریل به قطعات کوچک ۲×۲ میلی متر تقسیم گردد.
تهیه سوسپانسیون سلولی با هموژنایزر: قطعات بافت داخل بشر استریل حاوی ۵ میلی لیتر PBS ریخته شود.
پروب هموژنایزر را وارد بشر کنید. سرعت: ۸۰۰۰ rpm، زمان: ۳ بار، هر بار ۱۰ ثانیه با استراحت ۳۰ ثانیه ای بین هر مرحله. در طول فرآیند، لوله در حمام یخ قرار داده شود.
فیلتراسیون: محلول حاصل از صافی ۷۰ میکرون عبور داده شود.
سانتریفیوژ: به مدت ۵ دقیقه با سرعت ۱۲۰۰ دور در دقیقه سانتریفیوژ شود.
رسوب سلول ها را با محیط کشت یا بافر مناسب بازسازی کنید.
مثال واقعی از پروتکل تهیه سوسپانسیون سلولی با هموژنایزر آزمایشگاهی از بافت گیاه باکوپا مونیری
مواد و تجهیزات مورد نیاز:
- برگ گیاه باکوپا (۲ گرم)
- بافر فسفات استریل (PBS)
- هموژنایزر مکانیکی با پروب فولادی
- صافی ۵۰ میکرون
- سانتریفیوژ
- هود لامینار کلاس II
مراحل انجام:
شستشوی بافت: برگ های گیاه را به دقت از خاک و آلودگی های احتمالی با PBS استریل شستشو دهید. این مرحله باید در هود لامینار انجام شود تا از آلودگی های محیطی جلوگیری شود.
برش اولیه: برگ ها به قطعات کوچک ۱×۱ سانتی متری تقسیم می شوند تا خرد شدن آن ها راحتتر شود.
تهیه سوسپانسیون سلولی با هموژنایزر: قطعات برگ گیاه در یک لوله استریل به حجم ۱۰ میلی‌لیتر PBS قرار داده می‌شود. سرعت: ۶۰۰۰ rpm، زمان: ۲ بار، هر بار ۱۵ ثانیه با استراحت ۲۰ ثانیه
دمای نمونه را در طول فرایند با استفاده از یخ خشک زیر ۴ درجه سانتی گراد نگه دارید تا از تخریب مواد سلولی جلوگیری شود.
فیلتراسیون: محلول حاصل را از صافی ۵۰ میکرون عبور داده تا ذرات بزرگتر از سوسپانسیون حذف شوند.
سانتریفیوژ: محلول فیلترشده به مدت ۱۰ دقیقه در سانتریفیوژ با ۱۰۰۰ دور در دقیقه سانتریفیوژ شود تا سلول ها ته نشین شوند.
خرید هموژنایزر آزمایشگاهی از رویان ایران
تهیه سوسپانسیون سلولی یکی از پایه ای ترین و مهمترین فرایندهایی است که در آزمایشگاه های زیستی و کشت سلولی به صورت روتین انجام می شود. هموژنایزر آزمایشگاهی مکانیکی دستگاهی است که به استفاده از آن این فرایند به درستی انجام می شود و محلولی همگن به دست می آید. هموژنایزر آزمایشگاهی را با بهترین قیمت و کیفیت از فروشگاه آنلاین رویان ایران خریداری کنید. کارشناسان رویان ایران همه روزه جهت ارائه مشاوره رایگان و پاسخ به سوالات تخصصی شما در زمینه انتخاب مناسبترین دستگاه برای آزمایشگاه شما، پاسخگو هستند.
