ترموسایکلر

دستگاه ترموسایکلر

در زیست شناسی مولکولی، از ترموسایکلر برای تعیین توالی DNA، شبیه سازی، تولید پروب ها، کمی سازی DNA و RNA، مطالعه الگوهای بیان ژن، تشخیص مکان های دارای برچسب توالی و بسیاری از تکنیک های دیگر استفاده می شود.

استفاده از ترموسایکلر فراتر از PCR ساده و تقویت اسیدهای نوکلئیک است که شامل جهش زایی تصادفی و همچنین ساخت توالی DNA نوترکیب می باشد. از ترموسایکلر می توان در پروتکل هایی استفاده کرد که کنترل دقیق دما از جمله گرمایش اسلایدهای بافتی برای ترکیبی درجا مورد نیاز است. افزایش سطح کنترل دما ارائه شده توسط یک ترموسایکلر امکان مطالعه سینتیک وابسته به دما را فراهم می کند. به عنوان مثال، علاوه بر بهینه سازی پروتکل PCR، یک ترموسایکلر با ویژگی گرادیان امکان تعیین درجه حرارت مطلوب برای هر فعالیت آنزیمی را فراهم می کند.

نکات استفاده از ترموسایکلر

بهتر است از ترموسایکلر هایی که دارای درپوش حرارتی می باشند استفاده شود زیرا که باعث تعادل حرارتی مناسب می گردد. ترموسایکلرهای قدیمی تر براساس سیستم بلوک حرارتی کار می کنند و ترموسایکلر های جدیدتر مجهز به دستگاه های هواگردان هستند که از یک منبع حرارتی مثل لامپ یا سیم پیچ حرارتی استفاده می کنند که هوای گرم را به داخل محفظه هدایت می کند و مراحل سرد کردن توسط یک فن انجام می شود و هوای گرم را خارج کرده و هوای سرد را به محفظه وارد می کند تا به دمای جفت شدن مورد نظر برسند. سریع بودن تغییرات دمایی با واسطه هوا و از طرفی نسبت بالای سطح به حجم در لوله های موئین منجر به تغییر سریع دمای مخلوط PCR می شود و زمان های چرخش تا حد زیادی کاهش می یابد.

ترموسایکلر های جدید ابزارهای تشخیص داخلی دارند ولی قدیمی ترها نیاز به سیستم های کنترل دمایی مجزا دارند. یک روش ساده استفاده از ترموکوپلی است که به دماسنج دیجیتال متصل شده است و داخل لوله آزمایش حاوی آب قرار گرفته است. روش کم هزینه تر دیگر استفاده از یک دماسنج باریک قابل استفاده در لوله آزمایش حاوی آب است.

کاربرد دستگاه ترموسایکلر

• به منظور تشخیص بیماری های پیش از تولد استفاده می شود.
• به منظور تعیین جنسیت جنین مورد استفاده قرار می گیرد.
• به منظور تشخیص برخی بیماری ها از جمله ایدز مورد استفاده قرار می گیرد.
• به منظور بررسی روابط ژنتیکی مورد استفاده قرار می گیرد.
• برای تشخیص هویت بیمار نیز استفاده می شود.

مراحل استفاده از دستگاه ترموسایکلر

فرآیند ترموسایکلر در سه مرحله انجام می شود.

1. در مرحله نخست که واسرشت نام دارد، تک رشته های DNA به دست می آیند. در این مرحله محلول در دمای 98 درجه سانتی گراد حدود 30 ثانیه نگهداری می شود.
2. در ادامه دمای محلول به مقدار 60 درجه سانتی گراد طی 20 تا 40 ثانیه کاهش پیدا می کند و اتصال انجام می شود.
3. در مرحله طویل شدن دما تا 72 درجه سانتی گراد بالا می رود و طول DNA دو برابر می گردد.

منبع : رویان ایران | بزرگترین مرجع تخصصی تجهیزات آزمایشگاهی کشور