الکتروفورز ژل آگارز

فهرست عنواین

الکتروفورز ژل آگارز چیست

الکتروفورز آگارز برای جداسازی اسید های نوکلئیک با اعمال کردن یک میدان الکتریکی در یک بستر ایجاد شده با استفاده از ژل آگارز مورد استفاده قرار می گیرد. مولکول های آگارز با کنار هم قرار گرفتن به صورت سه بعدی منافذی ایجاد می کنند که برای جداسازی اسیدهای نوکلئیک بسیار مناسب هستند. ژل آگارز به خاطر اندازه بزرگ منافذ، قدرت جداسازی و تفکیک پایین تری نسبت به اکریل آمید برای DNA دارد، اما دامنه جداسازی آن بسیار وسیع تر است.

کاربرد الکتروفورز ژل اگارز

الکتروفورز ژل آگارز را می توان برای جداسازی مولکول ها بر مبنای بار یا وزن مولکولیشان استفاده نمود. مولکول هایی که بار الکتریکی بیشتری دارند، تحرک یا حرکت الکتروفورزی بیشتری از خود نشان می دهند و سریع تر منتقل می شوند. هنگامی که الکتروفورز در حال انجام می باشد به مرور دماي محیط پایه و بافرها  افزایش می یابد که منجر به تبخیر حلال می گردد، این اثر سبب صعود بافر از هر دو بخش بافري به درون محیط پایه می گردد، این جریان دو طرفه بر حرکت یون ها تأثیر می گذارد.

ژل الکتروفورز

معمولا برای تفکیک قطعات بزرگ  (DNA  بزرگتر از 500 جفت باز) درصورتی که هدف صرفا بررسی کیفی و تفکیک باشد، استفاده از ژل آگارز انتخاب اول است . جداسازی برمبنای بار، به ژلی نیاز دارد که مانند آگارز دارای منافذ بزرگتری باشد. تهیه ژل آگارز به مراتب سریع تر و آسان تر و کم هزینه تر از ژل پلی آکریلامید می باشد. یکی از مهمترین کاربردهای الکتروفورز ژل آگارز جداسازی بخش های حاصل از برش DNA با آنزیم های محدود کننده است. آگارز برای جداسازی اسید نوکلئیک ها و پروتئین های خیلی بزرگ استفاده می شود.

ژل آگارز

آگارز یک پلی ساکارید است که معموال از برخی جلبک های دریایی قرمز استخراج می شود. کارایی آگارز برای جداسازی ماکرومولکول ها و سوپر مولکول ها ست . آگارز به شکل پودر سفید است که به آن آب جوش اضافه می گردد، و هنگامی که سرد می شود حالت ژله ای به خود می گیرد. برای تفکیک اسیدهای نوکلئیک در صورت امکان از ژل آگارز استفاده می شود. تهیه ژل آگارز به مراتب سریع تر و آسان تر از ژل پلی اکریل آمید بوده و هزینه کمتری را در بر می گیرد.

ژل الکتروفورز

اندازه حفره موجود در ژل، بستگی به غلظت آگارز در بافر دارد .هر باند تفکیک شده حاوي چندین پروتئین با حرکت الکتروفورزي یکسان می باشد. در این نوع از محیط هاي الکتروفورزي باندها بیشتر به صورت پهن دیده می شوند زیرا ژل آگارز نسبت به محیط هاي دیگر مانند استات سلولز نسبت پروتئین ها از نفوذپذیري بالایی برخوردار می باشد.

مراحل تهیه ژل آگارز

  1. قالب ژل را آماده کنید.
  2. شانه ای با دنده های مناسب روی قالب قرار دهید.
  3. حجم ژل مورد نظر را تعیین کنید (اندازه گیری طول و عرض قالب و قطر ژل مورد نظر(
  4. پودر آگارز را وزن کنید.
  5. آگارز را در بافر حل کنید و آن را حرارت داده تا خوب بجوشد و قبل از خنک شدن به ازای هر ۱۰ میلی لیتر ژل یک میکرولیتر از محلول اتیدیوم بروماید اضافه کنید سپس آن را مخلوط کرده و داخل قالب بریزید.
  6. بعد از بسته شدن ژل آن را از قالب خارج کرده و داخل تانک الکتروفورز قرار دهید.

منبع : رویان ایران | بزرگترین مرجع تخصصی تجهیزات آزمایشگاهی کشور

امتیاز دهی به محتوا

دیدگاه‌ خود را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

به بالای صفحه بردن

فرم درخواست مشاوره