بلاتینگ چیست؟

بلاتینگ و یا لکه گذاری تکنیکی رایج است که با سه روش اصلی نورترن بلاتینگ، ساترن بلاتینگ و وسترن بلاتینگ قابل انجام است. هر کدام از روش های مذکور لکه گذاری برای یک نوع ماکرومولکول مناسب و قابل انجام می باشد. در واقع ساترن بلاتینگ برای DNA، نورترن بلاتینگ برای RNA و در آخر وسترن بلاتینگ برای توالی های پروتئینی کاربرد دارد. ما در این مقاله به توضیح بیشتر در ارتباط با تکنیک نورترن بلاتینگ و روش انجام آن خواهیم پرداخت.

فرآیند نورترن بلاتینگ

نورترن بلاتینگ فرآیندی تقریبا مشابه با ساترن بلاتینگ دارد با این تفاوت که در نورترن بلاتینگ به جای DNA از ماکرومولکول RNA استفاده می شود. این تکنیک در سال 1977 توسط آلوین و همکارانش  کشف شد و اغلب برای بررسی و شناسایی mRNA کاربرد دارد.

1. در این تکنیک ابتدا باید مراحل جداسازی RNA از نمونه خون یا بافت انجام شود.
2. سپس باید مولکول های RNA بر اساس اندازه و به وسیله الکتروفورز و ژل آگاروز از یکدیگر جدا شوند.
3. پس از جداسازی RNA ها براساس اندازه، نوبت آن است که ژل را بر روی کاغذی از جنس  DBM(Diazo Benzyloxy methyl) قرار دهیم تا RNA از ژل به کاغذ (غشا) منتقل شود. در تکنیک ساترن بلاتینگ به جای کاغذ های DBM از کاغذ های نیتروسلولزی استفاده می شود.
4. برای انتقال RNA از ژل به غشا باید در ظرفی به میزان کافی بافر بریزید. این بافر حاوی فرمامید است و مانع از تخریب RNA در دما های بسیار بالا می شود. سپس برای لایه اول از سکو استفاده کرده و بر روی آن چند لایه کاغذ نم گیر مانند اسفنج قرار دهید. بعد از آن به ترتیب کاغذ های بلاتینگ و سپس ژل الکتروفورز آماده شده در مرحله قبل را داخل ظرفو بر روی لایه های دیگر قرار دهید. و در آخر کاغذ DBM را قرار دهید. روی DBM چند لایه کاغذ و یک صفحه شیشه ای و چند وزنه کوچک قرار دهید تا لایه های پایین به هم فشرده شوند و انتقال سریع تر و بهتر انجام شود. پس از انجام تمام این مراحل RNA ها با خاصیت مویینگی از ژل به کاغذ DBM (غشا) منتقل می شوند. این نوع از غشا ها دارای بار مثبت هستند و بدین ترتیب اسید نوکلئیک های RNA با بار الکتریکی منفی و میل ترکیبی بالا اتصال محکمی با غشا بر قرار می کنند.
5. به منظور اتصال محکم و دائمی RNA به غشا و ایجاد پیوند های کووالانسی به اشعه UV و یا گرما نیاز است. برای این هدف غشا را داخل دستگاه ترانس ایلومیناتور قرار دهید.
6. اتفاقی که در  مرحله پیش هیبریداسیون رخ می دهد این است که پروب های نشان دار از متصل شدن به مکان های غیر اختصاصی منع می شوند و سپس هیبریداسیون با استفاده از پروب نشان دار برای بررسی تثبیت RNA انجام می شود. برای این منظور لوله آزمایش حاوی بافر و غشا را به مدت 2 تا 4 ساعت و در دمای 42 درجه سانتی گراد داخل انکوباتور قرار دهید. پس از آن مایع درون لوله آزمایش را خالی کرده و پروب نشان دار به همراه بافر به لوله آزمایش اضافه کنید و مجددا داخل انکوباتور قرار دهید تا فرآیند هیبریداسیون صورت گیرد.( به مدت حدودا یک شبانه روز). پس از آن محلول داخل لوله آزمایش را خارج کرده و غشا را شستشو دهید.
7. در نهایت می توانید با بررسی سیگنال های هیبریدی توسط فیلم X-ray مناطق متصل شده RNA به پروب را مشاهده و با استفاده از چگالی سنجی اندازه گیری های لازم را انجام دهید و نتایج را مشاهده کنید.

کاربرد های تکنیک نورترن بلاتینگ

• تشخیص برخی از بیماری ها نظیر عفونت های ویروسی
• بررسی تجزیه و پیرایش RNA
• تشخیص وزن مولکولی mRNA در نمونه
• مشاهده کاهش بیان ژن های مهار کننده تومور در سلول های سرطانی و افزایش بیان آنکوژن، مشاهده الگوی  بیان یک ژن خاص در طی تمایز و مورفوژنز در یک بافت و یا اندام

خرید تجهیزات آزمایشگاهی مناسب برای انجام نورترن بلاتینگ از رویان ایران

نورترن بلاتینگ یکی از تکنیک های اصلی و پر کاربرد در آزمایشگاه ها به ویژه آزمایشگاه های زیست شناسی است که اغلب به منظور تجزیه و تحلیل بیان ژن ها استفاده می شود. شما می توانید تجهیزات مورد نیاز خود نظیر ترانس ایلومیناتور، انکوباتور و الکتروفورز را از رویان ایران مرجع فروش تجهیزات آزمایشگاهی کشور با بهترین کیفیت و کمترین هزینه خریداری کنید. همچنین می توانید هفت روز هفته برای دریافت مشاوره رایگان و استعلام قیمت با کارشناسان ما تماس حاصل نمایید.