انواع شیوه های شمارش سلول ها

شمارش سلول بخش مهمی از فرآیند های آزمایشگاهی می باشد که کاربرد گسترده ای در کشت سلول و همچنین کاربرد های تشخیص بالینی دارد. دو نوع روش برای شمارش سلول ها وجود دارد که یکی از آن ها از طریق استفاده از میکروسکوپ و با به کار گیری لام هموسیتومتر صورت می گیرد که با انجام این روش هم سلول های زنده و سلول های غیر زنده قابل شمارش هستند. اما روش دیگری نیز وجود دارد که با استفاده از دستگاه کلنی کانتر انجام می شود و در این روش تنها سلول های زنده قابل شمارش هستند.

در این مقاله به تفصیل دستورالعمل شمارش سلول ها به وسیله لام هموسایتومتر و کلنی کانتر شرح داده شده است.

ساختار لام هموسیتومتر نئوبار

در مرکز این لام فرورفتگی H مانندی وجود دارد که فضای لام را به دو بخش تقسیم می کند. این دو بخش هر کدام شامل 9 مربع به اضلاع 1 میلی متر می باشند. 4 مربع اطراف این لام هر کدام به 16مربع تقسیم شده و برای شمارش گلبول های سفید کاربرد دارند. همچنین برای راحتی کار، تنها در 5 بخش مشخص شده در تصویر شمارش گلبول های قرمز را انجام می دهیم.

نحوه شمارش سلول با استفاده از لام هموسیتومتر

اکنون میکروسکوپ را با اتانول 70 درصد استریل کنید، بزرگنمایی میکروسکوپ را بر روی  10 X تنظیم کنید و سپس لام را زیر میکروسکوپ قرار دهید. به منظور این که شمارش را درست و بدون خطا انجام دهید تنها سلول هایی که بر روی خطوط بالا و سمت چپ هر مربع هستند را شمارش کنید. پس از آن با قرار دادن اعداد در فرمول های مخصوص می توانید غلظت سلولی را محاسبه کنید.

شمارش سلول های غیر زنده با استفاده از لام هموسیتومتر

همانطور که قبلا هم اشاره کردیم علاوه بر اینکه این تکنیک مناسب برای شمارش سلول های زنده است مناسب برای شمارش سلول های غیر زنده نیز هست. در واقع می توان با انجام این آزمایش تمام سلول ها (زنده و غیر زنده) را نیز شمارش کرد. این فرآیند با  انجام تکنیک حذف با رنگ ( Dye Exclusion Staining ) و  استفاده از رنگ های مخصوصی نظیر تریپان بلو و پروپیدیوم یدید قابل انجام است. به عنوان مثال با استفاده از رنگ تریپان بلو، این رنگ از غشاء سلول مرده عبور می کند و این سلول زیر میکروسکوپ با رنگ آبی قابل تشخیص است. در واقع تنها سلول های غیر زنده به رنگ آبی در می آیند.

ساختار دستگاه کلنی کانتر

شمارش براساس تکنیک هموسیتومتر نوعی شمارش دستی می باشد که ممکن است زمان بر و نتیجه آن با خطا های انسانی همراه باشد. دستگاه کلنی کانتر نوعی از دستگاه های آزمایشگاهی است که خود به دو مدل دستی و اتوماتیک طبقه بندی می شود.

دستگاه کلنی کانتر دستی حاوی بخش هایی نظیر قلم کانتر، گیره ارتباط، گیره نگهدارنده ذره بین و ذره بین می باشد. برای شمارش سلول با دستگاه کلنی کانتر ابتدا گیره نگهدارنده ذره بین را در محل مخصوص روی دستگاه قرار دهید سپس ذره بین را به آن متصل کنید. قلم کانتر و گیره ارتباط را نیز به دستگاه متصل کنید. توجه داشته باشید که بخش L مانند گیره ارتباط باید داخل پتری دیش قرار گیرد. اکنون پتری دیش حاوی کلنی  را بر روی دستگاه قرار دهید و دستگاه را روشن کنید. با روشن شدن دستگاه نوری از زیر پتری دیش پخش می شود. با شمارش هر یک از سلول ها توسط قلم کانتر می توانید تعداد سلول ها را در مانیتور روی دستگاه مشاهده کنید.

نحوه شمارش سلول زنده و کلنی با استفاده از TTC

کلنی کانتر اغلب در آزمایشگاه های میکروبی کاربرد دارد زیرا می توان با شمارش میکروارگانیسم ها و میزان غلظت آن ها با استفاده از تکنیک CFU (Colony Forming Unit) برای درمان و تشخیص بسیاری از بیماری ها اطلاعاتی کسب کرد.

این دستگاه اغلب برای شمارش باکتری های زنده و میکروارگانیسم ها کاربرد دارد. در این حالت با استفاده از رنگ 5,3,2 تری فنیل تترازولیوم کلراید (TTC)  می توان به وجود میکروارگانیسم های زنده در نمونه کشت شده پی برد. به این صورت که TTC با عملکرد آنزیمی میکروارگانیسم های زنده احیاء می شود و همین باعث تغییر رنگ و قرمز شده آن می شود.

خرید میکروسکوپ و کلنی کانتر از رویان ایران

شمارش سلول ها یکی از تکنیک های اصلی در آزمایشگاه به ویژه در آزمایشگاه های میکروبی و پاتوبیولوژی می باشد تا با به دست آوردن غلظت سلول بتوان بسیاری از بیماری ها را تشخیص داد. شما می توانید از رویان ایران مرجع فروش تجهیزات آزمایشگاهی کشور میکروسکوپ و کلنی کانتر را با کمترین هزینه و بهترین قیمت خریداری کنید. همچنین می توانید هفت روز هفته برای مشاوره رایگان و استعلام قیمت با کارشناسان رویان ایران تماس حاصل نمایید.